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Desarrollan sistema de diagnóstico de alta sensibilidad para Anemia Infecciosa del Salmón (ISAv)

Dra. Constanza Cárdenas, Dr. Jorge Olivares, Álvaro Labra y Dr. Nicolás Ojeda. Foto: PUCV.
Dra. Constanza Cárdenas, Dr. Jorge Olivares, Álvaro Labra y Dr. Nicolás Ojeda. Foto: PUCV.

Chile: Investigación desarrollada por la Pontificia Universidad Católica de Valparaíso (PUCV) y la Fundación COPEC-UC tiene por objetivo desarrollar un nuevo y robusto sistema de diagnóstico y caracterización del ISAv, rápido, sensible y específico, basado en RT-qPCR, capaz de discriminar entre variantes virales con diferente grado de patogenicidad.

El equipo investigador de la PUCV, dirigido por el Dr. Jorge Olivares, secundado por Álvaro Labra, y bajo la tutela del Dr. Sergio Marshall, referente OIE para el Virus ISA en Chile y laboratorio de referencia para el mismo de Sernapesca está llevando a cabo el proyecto de investigación “Desarrollo de un sistema de diagnóstico de alta sensibilidad capaz de discriminar entre variantes del Virus de la Anemia Infecciosa del Salmón (ISAv)”. El equipo de trabajo está igualmente complementado por académicos, postdoctorales y personal técnico de reconocida experiencia en el tema.

La asignación de recursos al proyecto tiene un monto de $124 millones, de los cuales $74 millones fueron aportados de forma pecuniaria por Fundación COPEC y el resto fue aportado en forma no pecuniaria por la PUCV, la cual compromete infraestructura, equipamiento, aparataje administrativo y logística del recurso humano.

El proyecto consta en diseñar y estandarizar ensayos RT-qPCR usando sondas TaqMan tanto para las regiones conservadas como para las regiones variables de dos segmentos virales escogidos por su relevancia en el potencial patogénico del virus, en una primera instancia en formato simplex y luego en segunda instancia en formato multiplex.

“Luego de ello, y para lograr una validación sólida, la someteremos a la norma oficial de validación (LABD/NT-3) utilizando muestras de referencia de nuestro laboratorio y luego en un número significativo de muestras de peces de campo naturalmente infectados. Así podremos presentar a la autoridad competente una alternativa mejorada que permita velar por la sustentabilidad de la salmonicultura”, explica el Dr. Olivares.

El profesional comenta que, finalmente, el equipo investigador se propuso diseñar una potencial estrategia de comercialización del sistema, que permita, por ejemplo, facilitar la detección de eventuales futuras variantes, condición esperable para ISAv al pertenecer a la misma familia del virus de la Influenza.

 

-¿Cuál es la importancia de la investigación en el contexto local?

La salmonicultura chilena está, después de 7 años, recuperándose del desastroso brote epizoótico generado por el virus de la Anemia Infecciosa del Salmón (ISAv) en el período 2007–2010 que diezmó la producción nacional de salmón Atlántico generando un impacto sanitario, económico y social como nunca se había visto antes en Chile. Como consecuencia, la autoridad nacional, así como el sector productivo, aprendieron la lección generando normativas, estrategias de gestión consensuadas y estableciendo alternativas de diagnóstico validadas que han permitido asegurar la sustentabilidad del sector. Sin embargo, en los últimos años, se ha visto la aparición de nuevas variantes de diversa patogenicidad, así como la coexistencia de variantes en un mismo pez, situación que requiere en forma urgente el proveer al sector productivo, de un nuevo sistema de diagnóstico que sea más asertivo que el vigente, capaz de determinar con precisión y rapidez la presencia o ausencia del virus, pero al mismo tiempo, de estar presente, nos provea de información respecto a las características más relevantes de éste, permitiendo una caracterización inmediata.

Lo anterior hace que el sistema sea aplicable por un lado a los programas de monitoreo propios de las empresas de cultivo que otorguen más cantidad y profundidad en la información para la toma de decisiones Productivo-Sanitarias y por otro lado, que pueda ser perfectamente incorporado como herramienta al Programa Sanitario Especifico de Vigilancia y Control de la Anemia Infecciosa del Salmón (PSEVC-ISA) del Servicio Nacional de Pesca y Acuicultura (Sernapesca).

Se aprendió la lección y se han dado los pasos necesarios, en forma sinérgica entre todos los interesados, para fortalecer la gestión sanitaria, económica y ambiental que provea sustentabilidad a una industria de tanta importancia nacional e internacional.

Resultados

En el transcurso del proyecto los investigadores notaron que su sistema de diagnóstico presenta numerosas ventajas frente al ensayo de diagnóstico actual. Entre estas ventajas están:

  • Capacidad de diagnóstico más robusta debido a la detección de dos segmentos genómicos diferentes, cada uno de ellos con funciones conocidas en el ciclo viral.
  • Capacidad de diferenciar las variantes del virus según sus características genéticas relacionadas con patogenicidad.
  • Capacidad de detectar casos de co-infección de dos variantes virales mediante la evaluación semi-cuantitativa de la expresión de los marcadores establecidos.
  • Sencillez y rapidez en la obtención e interpretación de resultados gracias al algoritmo creado.

“Por el momento nuestros resultados han sido absolutamente alentadores dado que producto del profundo estudio bioinformático realizado logramos ubicar una serie de marcadores tanto conservados como variables que pueden convertirse en blancos reales para el diagnóstico y la caracterización del virus”, argumentó el Dr. Olivares.

Considerando estos blancos se diseñaron y probaron varias alternativas de RTqPCR, seleccionando la que presentaron mayor eficiencia y robustez para combinarlas entre sí y conformar ensayos en formato multiplex que presentan costos similares a los actuales en términos de diagnóstico, pero una detección más robusta. Por otro lado, se está realizando el mismo trabajo, pero dirigido a las regiones variables del virus, de tal manera que con un segundo RT-qPCR en formato multiplex se pueda, en cuestión de horas, caracterizar el virus presente en la muestra.